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紫外可见分光光度计蛋白检测方法

[导读]紫外可见分光光度计蛋白检测方法

紫外可见分光光度计蛋白检测方法

双缩脲法是传统的分光光度法测定蛋白的方法,当含有两个或者两个以上的肽键的物质和碱性的硫酸铜反应时,形成紫色的络合物,这个颜色的产物是肽键中的氮原子和铜离子配价结合的结果。蛋白质分子中,络氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。形成颜色产物的量取决于蛋白质的浓度。实际测定时,必须预先用标准蛋白溶液制作一个标准校正曲线,通常用牛血清蛋白水溶液做蛋白质标准溶液。不同浓度的标准蛋白质溶液加入双缩脲试剂后,反应发生的颜色产物用紫外-可见分光光度计在540nm波长下测定吸光度,以双缩脲试剂加缓冲或水作空白对照。然后将测得的值分别对蛋白浓度作图,得标准曲线。未知蛋白样品用双缩脲试剂做同样处理,根据测得的吸光度值在白哦准曲线上直接查得未知蛋白质样品中的蛋白质浓度。


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